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3' ... A G G Py T G (N)18^ ... 5' 来源: 重组E. coli菌株,包含有从Methylophilus methylotrophu克隆的Mme I基因。 反应缓冲液: (随酶提供) NEBuffer 4 连接和再切: Mme I消化后,16°C下超过95%的DNA片段能够被高浓度的T4 DNA 连接酶 (5′ 末端浓度为1-2 µM)连接,连接后的片段不能被再切。 浓度: 2,000 units/ml (通过fX174 RF I DNA 鉴定 )。 贮存条件: 300 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl (pH 7.4@ 25°C), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 500 µg/ml BSA, 50%甘油。 贮存于-20°C。 稀释兼容性: 稀释液 B 热失活: 80°C 20分钟。 注意事项: 过量的Mme I阻断切割。应避免反应中使用超过4倍的酶量。 37°C下15分钟可完成彻底消化。冰浴中和50°C下都有明显的切割作用。 高离子强度(>200 mM)抑制Mme I的酶活性。 为获得良好的切割效果,反应体系中的SAM浓度至少需要达到50 µM。 高效的切割反应需要加入钾离子。 |
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