Not I R0189 Restriction Enzymes

Not I

	NEBuffer	1	2	3	4
	% Activity	0	50	100	25

5' ... G C^G G C C G C ... 3'
3' ... C G C C G G^C G ... 5'

来源: 重组E. coli菌株，克隆有Nocardia otitidis-caviarum (ATCC 14630) 的 Not I 基因。

反应缓冲液: (随酶提供) NEBuffer 3+ BSA
100 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT (pH 7.9 @ 25°C)。加入 100 µg/ml BSA。 37°C温育。

连接和再切: 经过Not I 10倍过量消化，超过95%的DNA片段能够被连接和再切。

浓度: 10,000 units/ml 和 50，000 units/ml（通过 Adenovirus-2 DNA鉴定）。

贮存条件: 200 mM NaCl, 20 mM Tris-HCl (pH 7.4), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.15% Triton X-100, 200 µg/ml BSA, 50% 甘油。贮存于 -20°C。

稀释兼容性: 稀释液 C

热失活: 65°C 20 分钟。

注意事项: 重叠的CpG甲基化阻断对哺乳动物基因组DNA的切割。彻底消化超螺旋质粒的Not I的需要量可能高达线性DNA的5倍。