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概述: 在生长和生存因子受体的生存信号方面,Akt1/PKB是一个关注焦点,它通过PI 3-激酶途径传导。AKT的Thr308和Ser473分别被PIP3和PDK2磷酸化。它直接通过磷酸化失活几种细胞凋亡前体的方法来促进细胞生存。 来源: 重组草地夜蛾(又称秋粘虫Spodoptera frugiperda)Sf9细胞,感染有重组杆状病毒(baculovirus),能高度表达MBP-Akt1融合蛋白。该病毒携带有T308D和S473D突变的Akt1残基140-480基因。 反应条件:1X Akt1/PKB 反应缓冲液 25 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25°C),5 mM β-Glycerol phosphate,2 mM dithiothreitol, 0.1 mM Na3VO4, 10 mM MgCl2,添加200 μM ATP,30°C温育。 注意最佳温育时间和酶浓度应根据特定反应底物的不同而调整。 反应缓冲液(随酶提供):10× Akt1/PKB反应缓冲液 比活性:约30,000 units/mg 分子量:79,000道尔顿 质量保证:无蛋白酶和磷酸酶活性。 单位定义:在25 μl的反应体系中,30°C条件下,1分钟内能催化1 pmol的磷酸转移到蛋白底物上(糖原合成酶激酶,NEB #P6040)所需要的酶量定义为1个活性单位。 浓度:10,000 units/ml。 贮存条件:50 mM NaCl, 25 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25°C), 1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol 和50% 甘油。贮存于-20°C。 参考文献:
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