Taq 2× Master Mix

概述:
Taq 2X Master Mix是一种优化的可以立即使用的PCR预混液,含有Taq DNA聚合酶, dNTPs, 标准Taq酶反应缓冲液和稳定剂. 很适合于常规的PCR的应用,模板包括提纯的DNA溶液,细菌克隆和cDNA产物.它可以从复杂基因组DNA中扩增出长达4 kb的片段或者从λDNA中扩增出长达5 kb的片段。

Taq DNA聚合酶是一种耐热的DNA聚合酶.它具有5′→ 3′的聚合酶活性和特异性的双链5′→ 3′的外切酶活性。

来源:
来源于E. coli菌株,含有从Thermus aquaticus YT-1中克隆的Taq DNA聚合酶基因。

提供试剂:
MgCl₂ (25 mM)

热失活: 无

反应条件:
1X Taq Master Mix

1X Taq Master Mix:
10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1.5 mM MgCl₂
0.2 mM dNTPs
0.5 mM DTT
5 % glycerol
0.08 % NP-40
0.05 mM Tween-20
25 U/ml Taq DNA Polymerase
pH 8.6 @ 25°C

单位定义:
1单位Taq DNA聚合酶是指75°C条件下, 30分钟内能使10 nmol 的 dNTP 结合到酸不溶物中所需的酶量。

单位检测条件:
1X标准Taq酶反应缓冲液,含有[3H]-dTTP 的200 μM dNTPs和200 μg/ml的牛活性胸腺DNA。

浓度:
2 X

储存温度:
-20°C

注意事项:

• Taq 2X Master Mix 可在 4°C稳定储存三个月,或者反复冻融15次。日常使用,建议储存于 4°C；
• M0270S 包含 400 单位的Taq DNA聚合酶；
  M0270L 包含2000单位的Taq DNA 聚合酶。

使用注意:

• 在25 μl 或 50 μl 反应体系中,用1X浓度的Taq Master Mix与模板和引物进行反应。

质量控制:
5 kb λ PCR:
在200 μM dNTPS, 0.2 μM 的引物和 1X 标准Taq反应缓冲液的条件下,用2.5单位的Taq DNA聚合酶扩增5 ng的λ DNA, ,扩增25 个循环后可以产生 100 ng 的特异性产物。

3′→ 5′外切活性:
在20 μl 反应体系中,将20单位的酶和10 nM的5′- FAM荧光标记的寡核苷酸探针在37°C 和 75°C条件下共浴30分钟未检测到3′→ 5′的降解。

核酸内切酶活性:

在50 μl 反应体系中将20单位的Taq DNA聚合酶与1 μg ΦX174 RF I DNA在75°C条件下共浴4小时,通过琼脂糖凝胶电泳检测到仅有< 10%的ΦX174 RF I DNA模板转换为RF II。