SuperL Taq DNA聚合酶 ( SuperL Taq DNA Polymerase )

贮存条件-20 °C

概述：本品由耐热Taq DNA聚合酶和一种具有3'→5'外切酶活性的高保真DNA聚合酶组成。其特点是：扩增效率高，可信度强，以λDNA为模板，可以快速有效地扩增长度2-20 kb的目的片段。

贮存或稀释缓冲液：20 mM Tris-HCl

(pH 7.5 @ 25°C,或pH 8.0 @ 4°C), 1 mM DTT, 100 mM KCl, 0.5%(v/v) NP-40, 0.5%(v/v) Tween-20, 0.1 mM EDTA, 50% 甘油(v/v)。贮存于-20°C。

随酶提供缓冲液：

10×PCR反应缓冲液（含20 mM MgSO₄）,

100mM MgSO₄。

质量控制检测：

每批产品均通过PCR反应进行功能检测：以λDNA为模板，特定引物扩增2-20kb PCR片段。另外，每批酶制剂均通过以下方法检测有无核酸酶污染。

核酸内切酶活性（切刻酶活力）在50 μl反应缓冲液中，将20单位的酶和1 μg ΦX174 RFⅠ型DNA于 72°C 或37°C条件下共育4小时，<5%的DNA转变为RFⅡ型。

核酸外切酶活性在50 μl反应缓冲液中，将20单位的酶和1 μg λDNA/Hind Ⅲ消化产物于72°C 或37°C条件下共育4小时，没有观察到明显带型变化。

核酸酶活性在50 μl反应缓冲液中，将1 μg λDNA与20单位的酶于72°C 或37°C条件下共育16小时，无明显DNA降解发生。

使用注意：由于该酶具有3'→5'核酸外切酶校读活力，会使引物降解，所以在使用时，当该酶与引物混合后，应立即开始反应。

扩增示例：

以λDNA为模板扩增长度分别为2 kb、8 kb和10 kb的目的片段：

1.PCR反应体系:

10×PCR反应缓冲液5 μl

dNTPs (各5 mM)2-4μl

引物FW (10μM)1-2 μl

引物RV (10μM)1-2 μl

λDNA (100μg/ml)2.5-50 ng

SuperL Taq (5 U/μl)0.5 μl

加灭菌双蒸水至50μl

2.PCR扩增条件:

1) 2/4 kb 扩增条件

94°C,3 min；

94°C,30 sec；56°C,1 min；72°C,2 min；25个循环；

72°C,5 min.

2) 8/10 kb扩增条件:

94°C,3 min；

94°C,30 sec；68°C,6 min ；30个循环；

72°C,5 min.

3.扩增结果：

Lane 1: 1 kb DNA ladder

Lane 2-5: 用SuperL Taq扩增的2、4、8和10 kb产物

Lane 6-9: 用进口Taq扩增的2、4、8和10 kb产物

参考文献:

1.Pluthero, F.G. (1993) Nucleic Acids Research. 21, 4850-4851.

2.Barnes, W.M. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 91, 2216-2220.

3.Eckert, K. A. and Kunkel, T. A. (1991) PCR Methods and Applications 1, 17-24.

4.Jannasch, H.W. et al. (1992) AppliedEnviron. Microbiol. 58, 3472-3481.

5.Perler, F. et al. PNAS USA (1996) 89, 5577.