核酸内切酶 V ( Endonuclease V )

• 重组酶
• 随酶提供10×反应缓冲液

概述：核酸内切酶 V是在E.coli中发现的一种DNA修复酶。它识别DNA中的脱氧次黄核苷，即脱氧腺苷的去氨基产物。核酸内切酶 V，也称为脱氧次黄核苷3’内切酶，识别含脱氧次黄苷(无论配对与否) 的双链或单链DNA。也可识别含脱碱基(AP)位点或尿素、碱基错配、插入/缺失错配、发夹结构、未配对loop环、折叠flaps和类-Y型结构的DNA，但是识别后者的能力不如前者。据信，核酸内切酶 V发挥DNA修复功能时，还需另外一种蛋白的存在，因为它不能切除DNA 上的脱氧次黄苷或受损碱基(1,2,3)。

核酸内切酶 V可以在距错配脱氧次黄苷第二个或第三个磷酸二酯键的3’端进行切割，切割第二个磷酸二酯键的效率是95%，第三个磷酸二酯键的效率是5%(2)，产生一个3’羟基、5’磷酸的切刻(4)。

来源:重组E. coli菌株，克隆有Endo V基因和编码麦芽糖结合蛋白（MBP）的基因的融合。融合蛋白纯化后具有生物活性。该蛋白含223个氨基酸，分子量为24.9 kDa (5)。

应用：

• 切割错配
• 切割含脱氧次黄苷的寡核苷酸，对含碱基错配的寡核苷酸亲和力较弱 (5)

随酶提供试剂：NEBuffer 4 (10X)

反应条件：1X NEBuffer 4，37°C温育。

1X NEBuffer 4:
20 mM Tris-acetate
50 mM potassium acetate
10 mM magnesium acetate
1 mM dithiothreitol
pH 7.9 @ 25°C

单位定义：在10 μl反应体系中，37°C条件下1小时内，能够切割1 pmol含单脱氧次黄苷位点*的34 mer 寡核苷酸二聚体所需要的酶量定义为一个单位。

* 脱氧次黄苷位点的制备：合成34 mer 寡核苷酸二聚体时，在其一条链的中间掺入脱氧次黄苷(dl)碱基。

浓度：10,000 units/ml

贮存条件：10 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1 mM dithiothreitol, 0.1 mM EDTA, 50%甘油和0.15% Triton X-100。pH 8.0 @ 25°C

贮存温度：-20°C

使用注意：当使用非随酶提供缓冲液时，建议增加酶量以达完全消化。

质量控制
质保声明：无核酸外切酶和核酸内切酶污染。

外切酶活性：在50 μl反应体系中，加入10单位核酸内切酶 V和1 μg [3H]标记的单、双链E. coli DNA (200,000 cpm/μg)混合物，于37oC条件下温育 4小时。释放小于0.1% 的放射活性物质。

每一批的质量控制数据均可以在随产品附带的说明书中查到。

参考文献

• Yao, M. and Kow, Y.W. (1996) J. Biol. Chem., 271, 30672-30673.
• Yao, M. and Kow, Y.W. (1995) J. Biol. Chem., 270, 28609-28616.
• Yao, M. et. al. (1994) J. Biol. Chem., 269, 31390-31396.
• He, B., Qing, H. and Kow, Y.W. (2000) Mutat. Res., 459, 109-114.
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