核酸内切酶 VIII ( Endonuclease VIII   )

• 重组酶
• 随酶提供10×反应缓冲液

概述：大肠杆菌核酸内切酶VIII既有N-糖基化酶活性也有AP-裂解酶活性。N-糖基化酶活性可释放双链DNA上受损的嘧啶碱基，产生一个脱嘧啶（AP）位点。AP-裂解酶活性则分别在AP 位点的3’和5’端切割磷酸二酯键，产生5’ 磷酸和3’磷酸末端。能被核酸内切酶VIII识别并切除的受损碱基包括：尿素、5, 6- 二羟基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羟基-5-甲内酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羟基-5, 6-二氢胸腺嘧啶和甲基丙醇二酰脲 (1,2)。尽管核酸内切酶VIII与核酸内切酶III的活性相似，但核酸内切酶VIII具有β和δ裂解酶活性，而核酸内切酶III只有β裂解酶活性。

来源：重组E. coli菌株，含有克隆的nei基因。

应用:

• 单细胞凝胶电泳(彗星试验) (3,4,5)
• 碱洗脱(6)
• 碱解旋Alkaline unwinding(7)

随酶提供试剂：Endonuclease VIII 反应缓冲液 (10X)。

热失活条件：75°C 10分钟。

反应条件：1X Endonuclease VIII反应缓冲液，37°C温育。

1X Endonuclease VIII 反应缓冲液:
10 mM Tris-HCl
75 mM NaCl
1 mM EDTA
pH 8.0 @ 25°C

单位定义：在10 μl含10 pmol荧光标记寡核苷酸二聚体的1X Endonuclease VIII反应缓冲液体系中，37°C条件下反应1小时，能够切割1 pmol含单个脱嘌呤/嘧啶位点*的34 mer 寡核苷酸二聚体所需要的酶量定义为一个单位。

*脱嘌呤/嘧啶位点的创建方法如下：37°C条件下，用1单位尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG）处理20 pmol含单尿嘧啶碱基的34 mer寡核苷酸二聚体2分钟。

浓度：10,000 units/ml。

贮存条件：10 mM Tris-HCl, 250 mM NaCl, 0.1 mM EDTA和50%甘油，pH 8.0 @ 25°C。

贮存温度：-20°C。

使用注意：用于彗星试验的建议稀释度为：1:104到1:105 (3,4,5,8)。

质量控制
质保声明：无核酸外切酶和核酸内切酶污染。

16-小时温育：在50 μl反应体系中，加入50 单位的核酸内切酶VIII和1 μg λ DNA (Hind III digest)，于37oC 条件下温育16小时，琼脂糖凝胶电泳检测DNA带型，无核酸酶降解现象。

外切酶活性检测: 在50 μl反应体系中，加入50 单位的核酸内切酶VIII和1 μg [3H]标记的E.coli DNA (2 x 105 cpm/μg)单、双链混合物，释放小于0.14%的放射活性物质。

内切酶活性检测: 在50 μl反应体系中，加入3单位核酸内切酶VIII和1 μg ΦX174 RF I型DNA，于37oC 条件下温育4小时。琼脂糖凝胶电泳检测，小于10%的DNA转变为RFII型。

每一批的质量控制数据均可以在随产品附带的说明书中查到。

参考文献

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