pMAL^TM 系统组成:

• pMAL-c2X载体: 10 µg
• pMAL-p2X载体: 10 µg
• Amylose 树脂: 15 ml (结合容量~40 mg)
• Factor Xa: 50 µg
• Anti-MBP 抗血清: 25 µl (用于Western blot 分析)
• MBP2*: 10 µg (用作SDS-PAGE的Marker)
• MBP2*-paramyosin-△Sal: 100 µg (Factor Xa 切割对照)
• E.coli 宿主菌TB1
• 详细的使用说明书

概述: pMAL™系统是一种高效的蛋白融合表达及纯化系统。pMAL载体含有编码麦芽糖结合蛋白（Maltose Binding Protein, MBP）的大肠杆菌malE基因，其下游的多克隆位点便于目的基因插入，表达N端带有MBP的融合蛋白。通过"tac"强启动子和malE翻译起始信号使克隆基因获得高效表达（1，2，3），并进一步利用MBP对麦芽糖的亲和性达到用Amylose柱对融合蛋白的一步亲和纯化（4）（图1)。

图1: pMAL 系统流程示意图

此系统的pMAL载体含有LacZα基因，目的基因的插入导致其失活，通过X-gal平板可进行蓝白斑筛选（5）。 pMAL载体都含有一段编码蛋白酶识别位点的序列，融合蛋白纯化后，通过Factor Xa（X）， Enterokinase (E) 或 GenenaseTM I (G)可将目的蛋白与MBP切割分离（6)。

图 2: MBP-paramyosin-△Sal 融合蛋白表达及纯化的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳结果
A: Lane 1:未诱导菌 Lane 2:诱导表达菌
B: Lane 1:过amylose柱，麦芽糖洗脱后的纯化蛋白, Lane 2:经Factor Xa切割后的纯化蛋白, Lane 3:经amylose柱二次洗脱后的paramyosin片段

pMAL系统的优势:

• 75%的蛋白可获得高效表达，蛋白产量可达100 mg/L
• 与其他几种常用表达系统研究比较，与MBP融合表达更能提高E. coli表达蛋白的可溶性（7）。
• 采用麦芽糖温和洗脱：无去污剂或变性剂对蛋白活性的影响。
• 可在细胞质或周质中表达(pMAL-p2X载体)：周质表达可提高二硫键的形成，促进蛋白折叠的形成。

参考文献:
1. Guan, C. et al. (1987) Gene 67, 21-30.
2. Maina, C. V. et al. (1988) Gene 74, 365-373.
3. Riggs, P. D. (1990). In F. M. Ausebel, R. Brent, R. E. Kingston, D. D. Moore, J. G. Seidman, J. A. Smith and K. Struhl (Eds.), Current Protocols in Molecular Biology (pp. 16.6.1-16.6.10). New York: John Wiley & Sons, Inc.
4. Kellerman, O. K. and Ferenci, T. (1982). In W. A. Wood (Ed.), Methods in Enzymology Vol. 90, (pp. 459-463). New York: Academic Press.
5. Yanisch-Perron, C. et al. (1985) Gene 33, 103-119.
6. LaVallie, E. R. and McCoy, J. M. (1990). In F. M. Ausebel, R. Brent, R. E. Kingston, D. D. Moore, J. G. Seidman, J. A. Smith and K. Struhl (Eds.), Current Protocols in Molecular Biology (pp. 16.4.1-16.4.17). New York: John Wiley & Sons, Inc.
7. Kapust and Waugh (1999) Protein Science 8, 1668-1674.

pMAL^TM系统相关产品

pMAL^TM系统载体
pMAL-c2X
#N8076S 10 µg 948.00 元
pMAL-p2X
#N8077S 10 µg 948.00 元
注：pMAL-c2X和pMAL-p2X载体随pMALTM蛋白融合表达及纯化系统提供。
pMAL-c2E
#N8066S 10 µg 948.00 元
pMAL-p2E
#N8067S 10 µg 948.00 元
pMAL-c2G
#N8068S 10 µg 948.00 元
pMAL-p2G
#N8069S 10 µg 948.00 元

pMAL^TM-c2 系列载体缺失malE 信号序列，导致融合蛋白在细胞质中表达。pMAL-p2系列载体含有malE 信号序列，它可引导融合蛋白穿过胞质膜，进入周质。所有这些载体都含有一段编码蛋白酶识别位点的序列，融合蛋白纯化后，通过Factor Xa（X），Enterokinase (E) 或 Genenase^TM I (G)可将目的蛋白与MBP切割分离。

Amylose 树脂 (Amylose Resin)
#E8021V 10 ml 745.00 元
#E8021S 15 ml 1,260.00 元
#E8021L 100 ml 4,500.00 元
Amylose 树脂预装柱
(Amylose Pre-packed Column)
#C8022V 2 ml预装柱 ( X 1) 240.00 元
#C8022M 2 ml预装柱 ( X 5) 960.00 元

概述：本品是一亲和基质，用来分离与麦芽糖结合蛋白融合的目的蛋白。
结合容量：每ml柱床体积可结合2-4 mg麦芽糖结合蛋白(MBP)。
贮存：本品预膨胀在20%的乙醇中。4°C贮存。

Factor Xa
#P8010V 25 µg 280.00 元
#P8010S 50 µg 636.00 元
#P8010L 250 µg 2,544.00 元
Factor Xa的识别序列为异亮氨酸-（谷氨酸或天冬氨酸）-甘氨酸-精氨酸[Ile-(Glu or Asp)-Gly-Arg]，切割位点位于精氨酸残基之后。

Enterokinase（肠激酶）
#P8070V 0.032 µg 445.00 元
#P8070S 0.063 µg 1,008.00 元
#P8070L 0.32 µg 4,032.00 元
肠激酶的识别序列为天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸(Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)，切割位点位于赖氨酸残基之后。

Genenase I
#P8075V 25 µg 280.00 元
#P8075S 50 µg 636.00 元
#P8075L 250 µg 2,544.00 元
当设计拟用GenenaseTM I切割的融合蛋白时，我们建议的识别序列为脯氨酸-甘氨酸-丙氨酸-丙氨酸-组氨酸-酪氨酸(Pro-Gly-Ala-Ala-His-Tyr)。有时由于蛋白质三维空间构象及周围氨基酸的影响，GenenaseTM I也会在其他组氨酸残基处发生切割。

抗MBP 抗血清
(Anti-MBP Antiserum)
#E8030S 0.2 ml 1,260.00 元
概述：用亲和纯化的麦芽糖结合蛋白免疫而获得的兔抗血清。
浓度和贮运：ELISA最终稀释滴度大于10-4。冷冻品。-20°C贮存。

抗MBP单克隆抗体
(Anti-MBP Monoclonal Antibody)
#E8032S 0.05 ml 1,584.00 元
#E8032L 0.25 ml 6,336.00 元
概述：抗MBP单克隆抗体是由杂交瘤细胞系B48的组织培养液经蛋白A亲和层析纯化得来。
浓度和贮运：浓度为1 mg/ml。保存液为 10 mM HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl和50%甘油。-20°C贮存。

MBP2*- paramyosin-△Sal
#E8051S 100 µg 636.00 元
概述：MBP2*-paramyosin-△Sal是MBP融合蛋白，在MBP和副肌球蛋白(paramyosin)结构域之间有Factor Xa的位点。
分子量：70.2 kDa。
浓度和贮运：浓度为5 mg/ml。保存液为20 mM Tris-HCl (pH 7.2), 0.2 M NaCl, 10 mM β-巯基乙醇, 50% 甘油和1 mM叠氮化钠。 -20°C 贮存。

MBP2* Protein:
#E8044S 1.0 mg 636.00 元
#E8044L 5.0 mg 2,544.00 元
概述：MBP2* 是野生型MBP蛋白带一段pMAL-c2 polylinker编码的氨基酸片段。它是由含有pMAL-c2衍生物的菌株表达纯化而来，在其Xmn I 位点插入了一个终止密码子。
分子量：42.5 kDa。
浓度和贮运：浓度为4-8 mg/ml。保存液为20 mM Tris-HCl (pH 7.2), 0.2 M NaCl,
1 mM EDTA和50%甘油。-20°C贮存。

malE Primer
#S1237S 0.5 A260 units 1,200.00 元
malE引物用于malE基因下游序列测序。
5' (dGGTCGTCAGACTGTCGATGAAGCC) 3'

M13/pUC Sequencing Primer
#S1224SC 0.5 A260 units 1,200.00 元
M13/pUC测序引物用于lacZα基因上游序列测序。
5' (dCGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC) 3'