| Gaussia 荧光素酶检测试剂盒 (Gaussia Luciferase Assay Kit) |
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概述:Gaussia荧光素酶检测试剂盒包含Gaussia荧光素酶(Gluc)活性检测所必需的试剂.通常多数是直接检测细胞培养上清. Gaussia荧光素酶是一种分离于海洋桡脚类动物的新型荧光素酶(1,2). 使用NEB的报告质粒,可使Gaussia荧光素酶表达在哺乳动物细胞内.该荧光素酶不需要ATP来催化底物腔肠素的氧化反应，在470 nm能发光，该酶与其他发光报告基因相比有许多优势。
图1:Gaussia荧光素酶检测试剂盒与商业获得的海肾荧光检测试剂盒检测Gluc光反应的动态比较图
优势:
- 荧光素酶携带有天然分泌信号，在表达时分泌进细胞培养液中，不需要裂解细胞。
- 比海肾（Renilla）和萤火虫的荧光素酶的信号高一千倍,使其成为理想的转录报告子(2)。
- 分泌的蛋白非常稳定并且可以在4°C储存数天而无活性丧失。
- Gaussia荧光素酶检测缓冲液能稳定荧光反应,因此使检测更加方便并且使结果的一致性更高(见图1)。
- 简单的三步法操作使多个样品的检测和不同时间点收集数据易于进行。
试剂盒成分:
Gaussia荧光素酶检测缓冲液 (1X)
Gaussia荧光素酶反应底物 (100X)
注意事项:
1.Gaussia荧光素酶检测底物应避光储存并且密封以防挥发。
2.Gaussia荧光素酶检测缓冲液由Targeting Systems配制,该配方属于个人所有。
使用注意:
给检测所使用的荧光计先建立一个线性范围. 通过把活性样品进行系列稀释后进行测量和制图。 如果结果超过量程范围,样品应该用PBS进行稀释或者减少反应时间 (比如:10秒换成5秒)。
鉴于GLuc的很高的稳定性,细胞上清置于-20°C数周,其活性不会丧失。
FAQ:
1.Gluc检测试剂盒能够用于细胞裂解液吗？
可以,尽管大于90%的Gluc活性被分泌出细胞外,由于Gluc很强的发光量,在细胞中残留的一些活性在通常情况下已经足够用于检测了。
2.Gluc检测试剂盒能够用于测量海肾荧光素酶的活性吗？
可以,底物腔肠素可以在Gluc或海肾荧光素酶催化的荧光反应中发生氧化.Gluc检测试剂可以用来检测海肾的荧光,但不能在同一个细胞中同时使用海肾和Gaussia的报告基因来检测。
3.Gluc检测工作液配制后可以存放吗？
最好是使用新鲜配制的工作液.配置好的工作液如果储存的话,应该在-20°C条件下储存一个月或者4°C避光储存数天。
可以, 但是应该使仪器在线性范围内能阅读数据。
参考文献:
- Verhaegen M. and Christopoulos T.K. (2002) Anal. Chem., 74, 4378-4385.
- Tannous, B.A., Kim, D.E., Fernandez, J.L., Weissleder, R., and Breake?eld, X.O. (2005) Mol. Ther., 11, 435-443.
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